產(chǎn)品特點(diǎn):
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。
細(xì)胞名稱 卵巢腺癌細(xì)胞;OVCAR-3
形態(tài)特性:
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 該細(xì)胞1982年由T.C.Hamilton等建系,源自一位60卵巢腺癌的腹水,是卵巢癌抗藥性研究的模型。
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)20%FBS
傳代方法: 1:2~1:4傳代,每周換液2~3次
傳代情況: P(19+5)
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 陰性?
產(chǎn)品名稱 | 卵巢腺癌細(xì)胞;OVCAR-3 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
貨號(hào) | EY-X63561 |
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,超低比價(jià),產(chǎn)品名稱貨期短,價(jià)格優(yōu),售后齊全。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞,以0.25%消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
人大腸癌單抗雜交瘤;CYL-1拉丁屬名: Pseudomonas putida6-溴吡啶-2-羧酸乙酯Human SNAPC5 ELISA Kit
皰疹病單抗雜交瘤;C5Mcab拉丁屬名: Chitinophaga pinensis2-乙?;?6-甲氧基吡啶Human SNAPIN ELISA Kit
小鼠雜交瘤;IE6-A2拉丁屬名: Enterococcus faecalis2-乙?;?6-甲氧基吡啶Human SMPX ELISA Kit
小鼠雜交瘤;2H7拉丁屬名: Beauveria bassiana D-半乳糖烯Human SNCAIP ELISA Kit
小鼠雜交瘤;1F8G5D6D2拉丁屬名: Aspergillus carbonariusD-半乳糖烯Human SMYD4 ELISA Kit
小鼠雜交瘤;3H8H10拉丁屬名: septicum(S)-(+)-扁桃酸甲酯Human SNRPA1 ELISA Kit
小鼠雜交瘤;1C9H6F2C1拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae Hansen(S)-(+)-扁桃酸甲酯Human SNAI1(Snail family transcriptional repressor 1) ELISA Kit
小鼠雜交瘤;3B10拉丁屬名: Penicillium urticae Bainier3-氯苯并[b]噻吩-2-甲酸Human SNAI3 ELISA Kit
小鼠雜交瘤;IIID12拉丁屬名: suis3-氯苯并[b]噻吩-2-甲酸Human SNAP23 ELISA Kit
小鼠雜交瘤;1D5H12F1A7用途: 用于抗蟲基因的分離和抗蟲相關(guān)基礎(chǔ)研究。二氯[(R)-(+)-2,2′-二(二苯基膦)-1,1′-聯(lián)萘基][(1R,2R)-(+)-1,2-二苯基乙二)釕(II)Human SLC7A11(Cystine/glutamate transporter) ELISA Kit
小鼠雜交瘤;1H7G10D10F7注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(1R,2R)-N,N'-雙[3-氧代-2-(2,4,6-三酰)亞丁基]-1,2-二苯基乙二合鈷(II)Human SNAP29 ELISA Kit
小鼠雜交瘤;2B2F1E6G3拉丁屬名: 非無(wú)菌藥品 耐膽鹽革蘭陰性菌(陰性)4-氨基-3-苯甲酸Human CALB1(Calbindin) ELISA Kit
小鼠雜交瘤;2C8G10D6F9拉丁屬名: 白酒 乙酸乙酯、己酸乙酯4-氨基-3-苯甲酸Human SMNDC1 ELISA Kit
抗人ORM1-like2單抗雜交瘤;ⅠE3-A10拉丁屬名: Pedobacter roseus2-氨基-5-氟-3-硝基吡啶Human SMARCB1(SWI/SNF-related matrix-associated actin-dependent regulator of chromatin subfamily B member 1) ELISA Kit
抗人Nigo單抗雜交瘤;
卵巢腺癌細(xì)胞;OVCAR-3人腺病抗原(ADV-Ag)ELISA試劑盒Smad7ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人大腸菌素(colicin)ELISA試劑盒SMAFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人軍團(tuán)菌抗原(LPAg)ELISA試劑盒SMELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人輪狀病抗原(RVAg)ELISA試劑盒sMHC-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人血吸蟲(schistosoma)ELISA試劑盒sMHC-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人不耐熱腸素B亞單位(LTB)ELISA試劑盒sMHC-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人冠狀病(CoronavirusesIgG)ELISA試劑盒SmIgELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人白色念珠菌(C.albicans)ELISA試劑盒SmIgELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。