細(xì)胞名稱 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；3T3-Swissalbino
形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 3T3細(xì)胞株是1962年TodaroG和GreenH從分離的瑞士小鼠胚胎中建立的；該細(xì)胞的生長受接觸性抑制，匯合狀態(tài)的單層細(xì)胞密度為40000個(gè)細(xì)胞/平方厘米；檢測結(jié)果顯示該細(xì)胞鼠痘病毒陰性；在塑料瓶中生長較好，在某些玻璃表面上可能狀態(tài)不佳；細(xì)胞生長飽和時(shí)其密度可以達(dá)到約50000cells/cm2。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代；3~4天1次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；3T3-Swissalbino | 貼壁生長 | EY-X63212 |
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冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
大鼠垂體瘤細(xì)胞；GH3形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 疏松貼壁，有漂浮的細(xì)胞簇Human IFN-γ ELISA KIT
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；3T3-Swissalbino形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Rat NGAL ELISA KIT
二氫還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細(xì)胞；CHO/dhFr-形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Rat IL-17 ELISA KIT
小鼠垂體瘤細(xì)胞；GT1-1形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Boviene IL-1β ELISA Kit
人前列腺癌細(xì)胞；DU145[DU145；DU-145]形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Human Insulin ELISA KIT
人胚腎細(xì)胞；293[HEK-293]形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Human IL-10 ELISA KIT
人肺癌細(xì)胞；A549[A-549]形態(tài)特性: 上皮樣；多角形生長特性: 貼壁生長Human TGF-β 1 ELISA KIT
小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞；MC3T3-E1形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Human C-Reactive Protein ELISA KIT
人乳腺癌細(xì)胞；MCF7形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Rat MIP-1α ELISA KIT
人細(xì)胞；HeLa形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Human IL-1F9 ELISA KIT
人乳腺癌細(xì)胞；MDA-MB-453形態(tài)特性: 上皮樣；多角形生長特性: 貼壁生長Rat IgG(Total) ELISA KIT
小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞與大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞之融合細(xì)胞；NG108-15[108CC15]形態(tài)特性: 扁平；圓形；直徑10～100mm生長特性: 貼壁生長Rat SCF ELISA KIT
小鼠畸胎瘤細(xì)胞；P19形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Rat MIP-2 ELISA KIT
人惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞；NTERA-2形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Human IL-18 ELISA KIT
人卵巢畸胎瘤細(xì)胞；PA-1形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Rat IL-10 ELISA KIT
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；NIH/3T3形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Mouse IL-12p40 ELISA KIT
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；3T3-Swissalbino小鼠17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)ELISA試劑盒11-DH-TXB2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒12-HETEELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA試劑盒15-LO/LOXELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠L苯解氨酶(PAL)ELISA試劑盒15-LO/LOXELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原30配體(sCD30L)ELISA試劑盒15-LO/LOXELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒16-αOHE-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠α2纖溶酶抑制物(α2-PI)ELISA試劑盒16-αOHE-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠泛素蛋白(Ub)ELISA試劑盒17-KSELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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