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產(chǎn)品名稱(chēng) | 赤狐肺成纖維樣細(xì)胞;RFL1 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
貨號(hào) | EY-X63781 |
細(xì)胞名稱(chēng) 赤狐肺成纖維樣細(xì)胞;RFL1
形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 該細(xì)胞系來(lái)源于一雌性赤狐的肺組織。1985年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。赤狐具有B染色體。
培養(yǎng)條件: M-199:withEarle'sBalancedSaltsSolution(EBSS)15%NBS
傳代方法: 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況: P3
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 熒光法(-)
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產(chǎn)品特點(diǎn):
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞,以0.25%消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。
膀胱癌特異性核基質(zhì)蛋白-4檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 抗肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)雜交瘤細(xì)胞;HGF2形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣BLCA-4
胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 抗CEA小鼠雜交瘤細(xì)胞;C2形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣SOX2
皮動(dòng)蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 抗抗人垂體泌乳素雜交瘤細(xì)胞;PRL2形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Cortactin;EMS1
破傷風(fēng)抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 抗抗人垂體泌乳素雜交瘤細(xì)胞;PRL1形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Tetanus Ab
脯氨4羥化酶a1檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 抗精核蛋白;HP1形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Prolyl 4-hydroxylase subunit alpha-1
葡萄球菌蛋白A檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 抗精核蛋白;HP2形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Staphylococal protein A
前列腺干細(xì)胞抗原檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 抗精核蛋白;HP3形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Prostate stem cell antigen
前列腺素F2α受體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 抗小鼠雜交瘤細(xì)胞;D7形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣PGF2α recepor
前梯度蛋白2檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 抗孕雜交瘤細(xì)胞;P01形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Anterior Gradient Protein 2
前心鈉肽檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 抗睪小鼠雜交瘤細(xì)胞;T01形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Pro Atrial Natriuretic Peptide
羥賴(lài)氨檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 抗α雜交瘤細(xì)胞;H80X形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣hydroxylysine
橋粒芯蛋白3檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 人胚肺二倍體細(xì)胞;2BS形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣Desmogleins 3
橋粒芯糖蛋白-1檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣Desmoglein-1
橋粒芯糖蛋白-3檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 抗b雜交瘤細(xì)胞;H10X形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Desmoglein-3
切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 抗雜交瘤細(xì)胞;HN4形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣excision repair cross-complementation group 1
趨化因子CCL4樣蛋白1檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 人胚腎細(xì)胞;293[HEK-293]形態(tài)特性: 上皮樣Chemokine C-C-Motif Ligand 4 Like Protein 1
趨化因子C-C-基元配體3樣蛋白1檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱(chēng): 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1形態(tài)特性: 上皮樣Chemokine C-C-Motif Ligand 3 Like Protein 1
赤狐肺成纖維樣細(xì)胞;RFL1R2A瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基規(guī)格:4.55g/300mL,50袋/盒
卵黃化鈉瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)規(guī)格:BR250g詳情介紹
LB肉湯(Lennox)規(guī)格:250g用途:用于基因工程菌大腸桿菌培養(yǎng)
腸道菌增菌液體對(duì)照培養(yǎng)基規(guī)格:9.0g/200mL,30袋/盒用途:培養(yǎng)基適用性實(shí)驗(yàn)
中國(guó)藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基規(guī)格:BR250g詳情介紹
厭氧培養(yǎng)液規(guī)格:250g用途:用于厭氧菌增菌培養(yǎng)