公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
胃腺癌細(xì)胞;SGC-7901[SGC7901] | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63390 |
細(xì)胞名稱 胃腺癌細(xì)胞;SGC-7901[SGC7901]
形態(tài)特性: 上皮樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 1979年建系;這株細(xì)胞源自一位56歲女性胃腺癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶。RPMI-1640培養(yǎng)12天,細(xì)胞開始生長(zhǎng),*傳代10天;31個(gè)月中傳代186代。免疫抑制的ICR小鼠、乳犬皮下移植成功,家兔、乳犬眼前房移植成功;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,從小鼠皮下侵襲至肌層。STR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SGC7901、SMMC7721、QGY7701、QGY7703、QSG7701、Ho-8910PM、Ho-8910、BEL7402等多株細(xì)胞為同一遺傳背景,懷疑彼此間存在交叉污染。
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代;2~3天1次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 培養(yǎng)法(-)
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冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
紅色熒光蛋白和螢光素酶標(biāo)記的
o Kit
草魚胚胎拉丁屬名: Staphylococcus aureus subsp. aureus2-氨基-5-巰基-1,3,4-噻二唑Human RIC8B ELISA Kit
草魚吻皮拉丁屬名: Pseudarthrobacter siccitolerans2-氨基-5-巰基-1,3,4-噻二唑Human RIMKLB ELISA Kit
兔骨髓間充質(zhì)干拉丁屬名: Bacillus subtilis2-氨基-5-巰基-1,3,4-噻二唑Human RIMS3 ELISA Kit
兔腎拉丁屬名: Paracoccus denitrificans3,4,5-三氟芐Human RHPN1 ELISA Kit
兔皮膚成纖維拉丁屬名: Escherichia coli正鋯Human RHPN2 ELISA Kit
果蠅胚胎用途: 與胡枝子共生固氮4-氟-3-三氟Human APOA1BP(Apolipoprotein A-I-binding protein) ELISA Kit
貓腦星形膠質(zhì)注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用4-氟-3-三氟Human RIBC2 ELISA Kit
犬腎系用途: 與大豆共生固氮,培養(yǎng)基pH4.6生長(zhǎng)4-氟-3-三氟Human RIMS3 ELISA Kit
猴孤雌單倍體胚胎干拉丁屬名: Bacillus sp.4-溴-2-氟苯甲Human RIMKLB ELISA Kit
非洲爪蟾腎用途: 教學(xué)科研4-溴-2-氟苯甲Human LRP11(Low-density lipoprotein receptor-related protein 11) ELISA Kit
中華鱉心肌來源注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用4-溴-2-氟苯甲Human RIMS4 ELISA Kit
中華鱉肺成纖維用途: 環(huán)境除臭Phe-Gly-GlyHuman RIN3 ELISA Kit
中華鱉脾臟成纖維拉丁屬名: Aspergillus ustus (Bainier) Thom et Church雙(2-二苯基膦乙基)苯基磷Human RINT1 ELISA Kit
迪慶綿羊皮膚成纖維拉丁屬名: Streptomyces roseoalutaceus3-(芐基氨基)酸乙酯Human RING1 ELISA Kit
綿羊肺成纖維注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用3-(芐基氨基)酸乙酯Human ribosomal protein L4 ELISA Kit
金黃地鼠皮膚成纖維拉丁
胃腺癌細(xì)胞;SGC-7901[SGC7901]猴子白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒Humananti-IgAantibodyELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
猴子層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒Humananti-IgEreceptorantibodyELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
猴子白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒Humananti-IVIgGantibodyELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
恒河猴主要組織相容性復(fù)合體(MHC/RhLA)ELISA試劑盒Humananti-Ku-antibodyELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
猴子腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)ELISA試劑盒Humananti-macrophageantibodyELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
猴子膠原酶I(CollagenaseI)ELISA試劑盒Humananti-Mi2-antibodyELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
猴子腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒Humananti-myelinantibodyIgAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
猴子白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒Humananti-parotidductantibodyELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。