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關(guān)于黃體生成激素elisa kitHIV測(cè)定過(guò)程

點(diǎn)擊次數(shù):1546 更新時(shí)間:2020-04-22

黃體生成激素elisa kitHIV測(cè)定過(guò)程:

1 配液:ELISA試劑盒將50ml濃縮洗刷液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋至1000ml備用。

2 編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板設(shè)陰性對(duì)照3孔、陽(yáng)性對(duì)照Ⅰ型、Ⅱ型各1孔,空白對(duì)照1孔。

3 加樣:分別在相應(yīng)孔加入待檢標(biāo)本、陰性、陽(yáng)性對(duì)照100μl,用封板膜封板后置37℃溫育30min。

4 洗刷:當(dāng)心把封板膜揭去,用洗板機(jī)挑選5次程序,洗板后拍干。 

5 加酶:每孔加酶結(jié)合物100μl(空白對(duì)照孔除外),充沛混勻,用封板膜封板后置37℃溫育30min。

6 洗刷:當(dāng)心把封板膜揭去,用洗板機(jī)挑選5次程序,洗板后拍干。

7 顯色:每孔加入顯色劑A液和B液各50μl,悄悄振動(dòng)混勻,封板后置37℃避光顯色15min。

8 測(cè)定:每孔加終止液50μl,悄悄振動(dòng)混勻。設(shè)定酶標(biāo)儀波長(zhǎng)為450nm(建議使用雙波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀比色,參閱波長(zhǎng)630 nm),空白調(diào)零,讀取各孔OD值。

9 判斷成果:核算臨界值(cut-off)(CO)值。 臨界值=陰性對(duì)照A均值+0.12 正常情況下,陰性對(duì)照孔的OD值≤0.10(若1孔陰性對(duì)照的OD值>0.1應(yīng)放棄,若有2孔或2孔以上陰性對(duì)照的OD值>0.1,應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。)。樣品OD值<臨界值者為HIV抗體陰性。

正常情況下,陽(yáng)性對(duì)照孔的OD值≥0.80(若1孔陽(yáng)性對(duì)照的OD值<0.8應(yīng)放棄,若有2孔或2孔以上陽(yáng)性對(duì)照的OD值<0.8,應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。樣品OD值≥臨界值者為HIV抗體陽(yáng)性。 

ELISA試劑盒注意:關(guān)于篩查陽(yáng)性標(biāo)本,應(yīng)從頭取樣雙孔復(fù)試,復(fù)試陽(yáng)性者應(yīng)按照《全國(guó)HIV檢測(cè)管理規(guī)范》送HIV確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn)。 質(zhì)量操控: 每塊板設(shè)陰陽(yáng)性及空白對(duì)照,并于每次實(shí)驗(yàn)用克己質(zhì)控血清作質(zhì)控,將質(zhì)控血清孔OD值采用“即刻法"核算或標(biāo)在質(zhì)控圖上,如質(zhì)控有效,標(biāo)明實(shí)驗(yàn)牢靠;如失控,則要查看試劑效期、貯藏溫度、試 驗(yàn)溫度是否正常、操作過(guò)程是否正確,直至從頭實(shí)驗(yàn)使其在控。 

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